意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2基因在桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)中的表達(dá)

利用Bac to Bac系統(tǒng)將意大利蜜蜂蜂毒磷脂酶A2(AmPLA2)基因cDNA克隆至轉(zhuǎn)移載體pFastBacHTa中,得到pBacHT-AmPLA2,再將其轉(zhuǎn)化入含穿梭載體Bacmid的受體大腸桿菌DH10Bac中,通過轉(zhuǎn)座作用,得到含AmPLA2基因的重組病毒rBacmid-AmPLA2的DNA.提取其基因組DNA,用脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染粉紋夜蛾細(xì)胞Tn-5B1-4,得到重組病毒rACV-Bac-AmPLA2.用此重組病毒感染Tn-5B1-4細(xì)胞,在細(xì)胞中表達(dá)AmPLA2.SDS-PAGE電泳結(jié)果顯示,與6×His Tag融合表達(dá)的產(chǎn)物蛋白分子量約為18 kD左右,表達(dá)量約占細(xì)胞總蛋白的5.35%.Western blot印跡顯示,融合表達(dá)產(chǎn)物能與意大利蜜蜂蜂毒AmPLA2抗血清發(fā)生免疫反應(yīng).生物活性測定顯示,含表達(dá)產(chǎn)物的細(xì)胞蛋白粗提物對底物蛋黃的酶活力約為6.13 μmol·min-1·mg-1.

作 者： 沈立榮 邢麗蘋 張傳溪 程家安 SHEN Li-Rong XING Li-Ping ZHANG Chuan-Xi CHENG Jia-An   作者單位： 沈立榮,SHEN Li-Rong(浙江大學(xué)生物系統(tǒng)工程與食品科學(xué)學(xué)院)

邢麗蘋,張傳溪,程家安,XING Li-Ping,ZHANG Chuan-Xi,CHENG Jia-An(浙江大學(xué)應(yīng)用昆蟲學(xué)研究所,杭州,310029) 

刊 名： 昆蟲學(xué)報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA ENTOMOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 49(3)  分類號： Q966  關(guān)鍵詞： 意大利蜜蜂   蜂毒   磷脂酶A2基因   桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)   表達(dá)  

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